NTG 诱变处理方法

1、首先，菌悬液的制备，将解脂假丝酵母菌种接斜面，28C培养2 d 后，挑两环于装有5 ml pH6磷酸缓冲液的离心管中3 500 r/min 离心10 min。倒去上清液，打匀后加人缓冲液，倒人装有玻璃珠的锥形瓶中，充分振荡数分钟，用装有4 层擦镜纸的小漏斗过滤到试管中，得到分散均匀的以单细胞为主的菌悬液。

3、然后，NTG 是一种致癌因子,在操作中要特别小心,切勿与皮肤直接接触。凡有亚硝基胍的器皿，都要用1mol/L NaOH 溶液浸泡，使残余亚硝基胍分解破坏。

5、然后，将15 em 见方的灭过菌的丝绒布绒面向上用橡皮筋固定在直径略小于培养皿鹊奁夭肢底的圆柱形木头上，将长有菌落的完全培养基平板(每皿30~.60 个菌落)倒扣在绒布上，轻压培养皿，使菌落印在绒布上作为印模，然后再分别转印至基本培养基和完全培养基平板上。经28C培养后，比较两皿上生长的菌落，如在完全培养基平板上长出的菌落而基本培养基平板的相应位置上却无菌落出现，就可初步判断它是营养缺陷型菌株。